Jaké kroky vedou k výrobě embryí v laboratoři (IVPE)?

Celý proces je zapotřebí vnímat jako komplexní záležitost, kde každý jednotlivý krok hraje nezastupitelnou roli.

1/ výběr dárkyně oocytů
2/ aspirace oocytů (OPU)
3/ dozrání oocytů
4/ oplození oocytů spermiemi vybraného plemeníka
5/ kultivace embryí

image
image

Dárkyně vajíček - která je vhodná?

Výhodou u IVPE je to, že jako dárkyně můžete využívat prakticky všechny kategorie plemenic v chovu.

1/ cyklující jalovice od cca 10.-11. měsíce

2/ krávy od cca 25 dne po porodu 

3/ zabřezlé krávy i jalovice do cca 90. dne po insem. 

4/ problematické plemenice, které mají potíže s cyklováním a zabřeznutím

Další možností je získání vajíček z vaječníků na jatkách.

image

Odsávání vajíček (aspirace)

Protože se jedná o poměrně náročnou proceduru na fixaci zvířete, je nutné ji provádět ve fixační kleci. 

Vajíčka se odsávají pomocí transvaginálně řízené aspirace, kdy se do pochvy zavede speciální držák na sondu a odsávací aparataru. Jakmile je na monitoru ultrazvuku zobrazen vaječník, začnou se jednotlivé folikuly propichovat a odsává se folikulární tekutina s vajíčkem.

image

Zrání vajíček (maturace)

Aspirovaná vajíčka z vaječníku nejsou schopné oplození, protože jsou ještě "nezralá". Z toho důvodu se nechávají v laboratoři v definovaných podmínkách (atmosféra, vlhkost, teplota) vyvinout do oplození schopného stádia (tzv. dozrát). 

image

Oplození vajíček spermiemi

Oplození v laboratorních podmínkách probíhá tak, že se smíchají vajíčka a spermie ve speciálních plastových miskách. Spermie  se musí připravit tak, že se vyberou pouze ty nejlepší ze všech pomocí gradientové selekce a pokud nejsou inseminační dávky dostatečně kvalitní, není k dispozici dostatek spermií. Obzvlášť problematické jsou v tomto směru některé sexované inseminační dávky. 

image

Kultivace oplozených vajíček do stádia embrya

Po oplození se nechávají vajíčka dále vyvíjet ve speciálním inkubátoru. Definovanými podmínkami se snažíme nahradit dělohu matky a necháváme embrya růst do stádia blastocysty.